Citochimie esteraze nespecifice

Citochimia se bazează pe studiul microscopic al componenţilor chimici celulari: nucleoproteine, proteine, hidraţi de carbon, lipide şi enzime.

Coloraţiile citochimice oferă informaţii în legătură cu linia celulară şi diferenţierea celulelor hematopoietice şi joacă un rol important în evaluarea anomaliilor hematologice, în special în diagnosticul diferenţial şi clasificarea bolilor maligne ale sângelui.

Un principiu de care trebuie ţinut seama este faptul că, o reacţie pozitivă este întotdeauna valoroasă, în timp ce reacţia negativă este neconcludentă. Pentru certitudine, în majoritate cazurilor reacţiile citochimice se practică cu un martor pozitiv al reacţiei^1;2.

-negativ ; +/- slab pozitiv ; + pozitiv ;+ + intens pozitiv

Un diagnostic corect de laborator al LAM, cu subtipurile FAB şi LAL necesită coroborarea datelor de microscopie optică – morfologie şi coloraţii citochimice – cu imunofenotiparea, eventual datele de microscopie electronică.

Informaţii generale

Esterazele sunt enzime care hidrolizează esteri alfatici şi aromatici şi sunt utile pentru a distinge celulele seriei granulocitare de celulele seriei monocitare.

Naphthol AS-D cloracetat esteraza este prezentă în celulele liniei granulocitare şi se găseşte în cantitate mică sau este absentă în monocite şi precursorii monocitelor.

Esteraza nespecifică este, aşa cum îi arată şi numele, o enzimă ubiquitară prezentă în mai multe tipuri de celule, printre care: monocite, celule T şi megacariocite. Poate utiliza ca substraturi: alfa-naftil acetat, alfa-naftil butirat, naftol AS- D acetat⁴.

Principiul metodei

Ne vom referi la reacţia alfa-naftil acetat esteraza (ANAE): alfa-naftil acetatul este hidrolizat de esteraze în alfa-naftol, care în prezenţa unei sări de diazoniu formează un compus de culoare roşu-brun, insolubil în apă^1;3.

Recomandări pentru determinarea esterazelor nespecifice

– diagnosticul LA monocitare tipurile M4 si M5¹.

Pregătire pacient – à jeun (pe nemâncate) sau postprandial (după mese)³.

Specimen recoltat

a) sânge capilar şi/sau aspirat medular – frotiuri

b) se recomandă recoltarea simultană de sânge venos pentru hemogramă³.

Cauze de respingerea probei

– frotiuri nefixate în maxim 8 ore de la recoltare;

– frotiuri executate din sânge recoltat pe EDTA³.

Recipient de recoltare

a) se execută frotiuri de sânge capilar direct pe lame de microscopie;

b) vacutainer cu EDTA K3 (capac mov), pentru hemogramă³.

Cantitate recoltată

a) 3-5 frotiuri;

b) 2 mL³.

Prelucrare necesară după recoltare

Este preferabil ca fixarea frotiurilor să se facă în primele 30 minute de la recoltare. Eventual, se poate face în primele 8 ore. Amestec fixator: alcool etilic 9 părţi + formol 40% 1 parte. Fixarea se cronometrează 30 secunde, după care frotiurile se spală cu jet de apă de robinet. Frotiurile fixate se pot colora imediat sau se pot păstra câteva zile la temperatura camerei, până la colorare³.

Stabilitate probă

– frotiurile nefixate sunt stabile maxim 8 ore la 18-30ºC;

– frotiurile fixate sunt stabile 5 zile la temperatura camerei³.

Metoda – examinare microscopică³.

Interpretarea rezultatelor

Bibliografie